Guía docente de Aplicación de los Cultivos Celulares a la Investigación en Nutrición (M28/56/1/69)

1. Introducción a las Técnicas de cultivos celulares.- Tipos de cultivos, condiciones requeridas para un cultivo celular, equipamiento esencial de un laboratorio de cultivos.
2. Preparación de medios de cultivo. Descongelación y expansión de células criopreservadas.
3. Monitorización y mantenimiento de cultivos celulares. Disgregación y subcultivo.

          3.1. Recuento en cámara de Neubauer.

          3.2. Prueba de viabilidad del azul tripán.

     4. Monitorización de subcultivos celulares. Diseño de distintas condiciones experimentales adaptadas a diferentes objetivos de investigación.

          4.1. Viabilidad celular mediante la técnica de Cristal Violeta.

          4.2. Estado metabólico mediante la prueba de MTT.

          4.3. Aplicación de cultivos a determinación de capacidad antioxidante de alimentos funcionales.

          4.4. Aplicación de cultivos a determinación de biodisponibilidad de nutrientes.

          4.5. Aplicación de cultivos a estudios específicos de metabolismo glucídico y lipídico.

No hay ninguno específico para esta asignatura.

El alumno sabrá/comprenderá:

• La importancia de los cultivos celulares y su potencialidad en los estudios de nutrición.
• Los condicionantes a tener en cuenta para la programación y el desarrollo de cultivos celulares en estudios de nutrición.
• La metodología necesaria para iniciar un cultivo celular y asegurar el correcto desarrollo de las células para poder programar diversos experimentos enestudios de nutrición.

El alumno será capaz de:

• Identificar todos los componentes necesarios para realizar un cultivo celular y seleccionar el tipo de cultivo atendiendo a los objetivos planteados del estudio.
• Iniciar un cultivo celular estándar y desarrollarlo hasta el grado de confluencia de las células.
• Aplicar distintas técnicas para comprobar la viabilidad y el estado metabólico celular en respuesta a diferentes tratamientos.
• Realizar distintos diseños experimentales que le permitan adaptar las técnicas de cultivo a diversas líneas de investigación en nutrición.

Tema 1. Introducción a las Técnicas de cultivos celulares.- Tipos de cultivos, condiciones requeridas para un cultivo celular, equipamiento esencial de un laboratorio de cultivos.

Tema 2. Preparación de medios de cultivo. Descongelación y expansión de células criopreservadas.

Tema 3. Monitorización y mantenimiento de cultivos celulares. Disgregación y subcultivo.

            3.1. Recuento en cámara de Neubauer.

            3.2. Prueba de viabilidad del azul tripán.

Tema 4. Monitorización de subcultivos celulares. Diseño de distintas condiciones experimentales adaptadas a diferentes objetivos de investigación.

            4.1. Viabilidad celular mediante la técnica de Cristal Violeta.

            4.2. Estado metabólico mediante la prueba de MTT.

            4.3. Aplicación de cultivos a determinación de capacidad antioxidante de alimentos funcionales.

            4.4. Aplicación de cultivos a determinación de biodisponibilidad de nutrientes.

            4.5. Aplicación de cultivos a estudios específicos de metabolismo glucídico y lipídico.

1. Introducción al laboratorio de cultivo celular: Inicio de un cultivo celular. Preparación del medio de cultivo y siembra de un cultivo celular en frasco de cultivo.
2. Monitorización de un cultivo celular: Observación microscópica de la evolución del cultivo celular y detección de la contaminación.
3. Expansión y mantenimiento de un cultivo celular: Subcultivo, recuento y viabilidad celular, siembra de un cultivo celular en multiplaca. Renovación del medio de cultivo de un cultivo celular.
4. Ensayo de citotoxicidad en un cultivo celular: Evaluación de la toxicidad de tratamientos en un cultivo celular.

R. Ian Freshney Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications, Sixth Edition 2010 John Wiley & Sons, Inc. DOI: 10.1002/9780470649367

• Kapravelou G, Martínez R, Andrade AM, López Chaves C, López-Jurado M, Aranda P, Arrebola F, Cañizares FJ, Galisteo M, Porres JM. Improvement of the antioxidant and hypolipidaemic effects of cowpea flours (Vigna unguiculata) by fermentation: results of in vitro and in vivo experiments. J Sci Food Agric. 2015, 95(6):1207-16. doi: 10.1002/jsfa.6809.
• Arrebola F, Fernández-Segura E, Campos A, Crespo PV, Skepper JN, Warley A. Changes in intracellular electrolyte concentrations during apoptosis induced by UV irradiation of human myeloblastic cells. Am J Physiol Cell Physiol. 2006, 290(2):C638-49.
• Arrebola F, Zabiti S, Cañizares FJ, Cubero MA, Crespo PV, Fernández-Segura E. Changes in intracellular sodium, chlorine, and potassium concentrations in staurosporine-induced apoptosis. J Cell Physiol. 2005, 204(2):500-7.
• Galisteo M, Rissel M, Sergent O, Chevanne M, Cillard J, Guillouzo A, Lagadic-Gossmann D. Hepatotoxicity of tacrine: occurrence of membrane fluidity alterations without involvement of lipid peroxidation. J Pharmacol Exp Ther. 2000, 294(1):160-7.
• Galisteo M, Marc N, Fautrel A, Guillouzo A, Corcos L, Lagadic-Gossmann D. Involvement of cyclic nucleotide- and calcium-regulated pathways in phenobarbital-induced cytochrome P-450 3A expression in mouse primary hepatocytes. J Pharmacol Exp Ther. 1999, 290(3):1270-7.

• https://www.lgcstandards-atcc.org/Products/Cells_and_Microorganisms/Cell_Lines.aspx?geo_country=es.
• http://www.phe-culturecollections.org.uk/collections/ecacc.aspx.
• http://www.iuns.org.

El artículo 17 de la Normativa de Evaluación y Calificación de los Estudiantes de la Universidad de Granada establece que la convocatoria ordinaria estará basada preferentemente en la evaluación continua del estudiante, excepto para quienes se les haya reconocido el derecho a la evaluación única final.

Sistema de Evaluación Continua.

Se establecerán los criterios de evaluación teniendo en cuenta los contenidos así como las competencias a desarrollar con el presente curso. Dichos criterios serán expuestos y explicados a los alumnos.

El artículo 19 de la Normativa de Evaluación y Calificación de los Estudiantes de la Universidad de Granada establece que los estudiantes que no hayan superado la asignatura en la convocatoria ordinaria dispondrán de una convocatoria extraordinaria. A ella podrán concurrir todos los estudiantes, con independencia de haber seguido o no un proceso de evaluación continua. De esta forma, el estudiante que no haya realizado la evaluación continua tendrá la posibilidad de obtener el 100% de la calificación mediante la realización de una prueba y/o trabajo.

Estudiantes de calificación por curso:

El artículo 8 de la Normativa de Evaluación y Calificación de los Estudiantes de la Universidad de Granada establece que podrán acogerse a la evaluación única final, el estudiante que no pueda cumplir con el método de evaluación continua por causas justificadas. Para acogerse a la evaluación única final, el estudiante, en las dos primeras semanas de impartición de la asignatura o en las dos semanas siguientes a su matriculación si ésta se ha producido con posterioridad al inicio de las clases o por causa sobrevenidas. Lo solicitará, a través del procedimiento electrónico, a la Coordinación del Máster, quien dará traslado al profesorado correspondiente, alegando y acreditando las razones que le asisten para no poder seguir el sistema de evaluación continua.

Evaluación de las competencias de las convocatorias ordinaria y extraordinaria:

• Realización de prueba escrita de los conocimientos impartidos en el curso. Porcentaje de la calificación = 60%.
• Valoración de un trabajo relacionado con los contenidos del curso. Se valorará la búsqueda bibliográfica de información en fuentes contrastadas, orden y claridad en la redacción y rigor científico de los conocimientos. Porcentaje de la calificación = 40%.

Este curso tiene fundamentalmente un contenido de tipo práctico y experimental. Se pretende mediante sesiones prácticas en el laboratorio proporcionar a los estudiantes que lo realicen las destrezas y habilidades necesarias para implementar los conocimientos teóricos sobre las técnicas de cultivos celulares. Así mismo, se pretende que los estudiantes de este curso sean capaces de proceder a la adaptación de dichos conocimientos a la formulación de distintos diseños experimentales orientados a condiciones y líneas específicas de investigación en nutrición.

Información de interés para estudiantado con discapacidad y/o Necesidades Específicas de Apoyo Educativo (NEAE): Gestión de servicios y apoyos (https://ve.ugr.es/servicios/atencionsocial/estudiantes-con-discapacidad).

Alumnos con necesidades específicas de apoyo educativo (NEAE): Siguiendo las recomendaciones de la CRUE y del Secretariado de Inclusión y Diversidad de la Universidad de Granada, los sistemas de adquisición y de evaluación de competencias recogidos en esta guía docente se aplicarán conforme al principio de diseño para todas las personas, facilitando el aprendizaje y la demostración de conocimientos de acuerdo a las necesidades y la diversidad funcional del alumnado. La metodología docente y la evaluación serán adaptadas a los estudiantes con necesidades específicas de apoyo educativo (NEAE), conforme al Artículo 11 de la Normativa de Evaluación y de Calificación de los estudiantes de la Universidad de Granada, publicada en el Boletín Oficial de la Universidad de Granada nº 112, de 9 de noviembre de 2016.
Inclusión y Diversidad de la UGR: En el caso de estudiantes con discapacidad u otras necesidades específicas de apoyo educativo, el sistema de tutoría deberá adaptarse a sus necesidades, de acuerdo a las recomendaciones de la Unidad de Inclusión de la Universidad, procediendo los Departamentos y Centros a establecer las medidas adecuadas para que las tutorías se realicen en lugares accesibles. Asimismo, a petición del profesor, se podrá solicitar apoyo a la unidad competente de la Universidad cuando se trate de adaptaciones metodológicas especiales.